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离子交换色谱对抗VEGFR2单抗的电荷异质性分析

来源:创特科技 发布日期 2018-12-12 15:49 浏览:

单克隆抗体有两条重链两条轻链组成,相对分子质量高达150000左右,结构复杂。在单抗制品的生产和储存过程中会发生复杂的翻译后修饰而导致巨大的异质性,其中电荷异质性对单抗的稳定性及其生物学功能发挥具有重要的影响而成为关键质量属性,并且电荷异质性可反映其生产工艺的稳定性,所以受到生物技术产业界及监管机构密切关注。
单抗C末端赖氨酸的不均一性、甲硫氨酸氧化、天冬氨酸转变为丁二酰亚胺等可能使单抗产生碱性变异体峰,其中C末端赖氨酸的不均一性最为常见且有一定比例;N-糖末端的唾液酸化修饰、氨基酸残基的脱酰胺等可使单抗产生酸性变异体峰,其中N-糖末端的唾液酸化修饰较常见,尤其对于鼠源性杂交瘤细胞系如NSO何SP2/2细胞所表达的单抗而言其比例一般较高。几乎所有这些翻译后修饰均可改变单抗的表面电荷分布特性,所以离子交换高效液相色谱可有效对单抗的电荷异质性进行分析。
研究利用离子交换高效液相色谱分析了一种VEGF2单抗的电荷异质性,并结合羧肽酶B和N-糖酰胺酶F2种酶切对此抗体电荷异质性形成的原因进行了初步研究
仪器准备


 LC-600A智能全控液相色谱系统由P600高压恒流泵与UV600紫外检测器直接构成等度分析系统。使用WS600工作站可以同时控制数台P600高压恒流泵、UV600紫外检测器及恒温柱箱等,实行多元高压洗脱、波长扫描等功能。
样品处理
样品的去糖处理
样品的去末端赖氨酸处理
 
 
 
谱图分析:


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